Projektinformation

Sammanfattning

Kolorektalcancer är en av de vanligaste cancerformerna i västvärlden. Årligen insjuknar 1 miljon personer i världen i kolorektalcancer. I Sverige är motsvarande siffra 5000. 70% av dessa undergår kirurgi med kurativ intention, 10% har överväxt på närliggande organ och 20% har fjärrmetastaser. Varje år dör 2500 patienter i Sverige i denna diagnos. Ett stort antal patienter som radikalopererats för sin primärtumör kommer alltså att få recidiv och avlida i sin tumörsjukdom. Histopatologisk undersökning av tumören ger vid ett stort antal tumörsjukdomar underlag för indelning i stadier med olika prognos. Även om risken för återfall i vissa grupper således är stor överlever ett stort antal patienter med ”dålig prognos” . Det är därför viktigt att förbättra den prognostiska informationen (1).
Immunsystemet har visats spela en viktig roll för maligna tumörers progression. Man har kunnat visa att typ, förekomst samt lokalisation av immunceller i humana kolorektaltumörer korrelerar med överlevnad och ger en bättre prognostisk information än den nuvarande histopatologiska stadieindelning som används (2).

Vi har nyligen publicerat data som visar att mononukleära blodcellers produktion av interleukin-6 (IL-6) efter stimulering med lipopolysackarid (LPS) korrelerar med överlevnad hos patienter som radikalopererats för kolorektalcancer (3). Resultaten är baserade på 5 års överlevnad och ingen patient med normal immunfunktion hade avlidit i sin tumörsjukdom under denna tid. Analysen gjordes veckan före operation och kan därmed ge vägledning för pre-operativ neo-adjuvant behandling och hur extensiv kirurgisk behandling som behöver utföras. Dessutom ger utfallet av detta test värdefull information för ställningstagande till post-operativ medikamentell behandling. I ovanstående analys odlas patienters mononukleära blodceller i närvaro av autologt serum. Vi har även visat att LPS inducerad IL-6 produktion är beroende av serumfaktorer genom att odla blodceller från friska givare i odlingsmedium innehållande serum från patienter med hög IL-6 produktion och därmed kunnat påvisa en ökning av IL-6 hos dessa celler.

Att kunna karaktärisera dessa serumfaktorer är av stor betydelse. Vi har tagit fram en modell baserad på specifik affinitetskromatografi där vi har möjlighet att identifiera mycket låga koncentrationer, picogram/ml, av cancer relaterade immunmodulerande faktorer i serum. Modellen baseras på en artificiell cellyta. Ytproteiner på mononukleära blodceller biotinyleras, utan att intracellulära proteiner reagerar, därefter lyseras cellerna med detergent och de biotinylerade proteinerna binds till en streptavidin konjugerad agaros matrix. Serum adsorberas till sådan matrix, bundna serumproteiner elueras och separeras efter storlek och laddning med 2 dimensionell elektrofores. Genom att jämföra proteinmönster mellan patienter med hög respektive låg LPS inducerad IL-6 produktion kan specifika fraktioner som korrelerar till dålig prognos identifieras. Dessutom kommer identifiering av separerade proteiner med matrix assisted laser desorbtion/ionization time of flight –mass spectometry (MALDI –Tof MS) att göras och ytterligare identifiering av protein peptider görs genom aminosyra sekvenering med electro spray ionization tandem mass spectometry (ESI MS/MS). Fortsatt utveckling och analysering med den här modellen erbjuder en betydande framgång när vi vill identifiera immunmodulerande faktorer eftersom dessa endast förekommer och är aktiva vid väldigt låga koncentrationer.

Projektbudget

Externa bidragsgivare i projektet för samtliga medarbetare

Äskade medel